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INVESTIGACIÓN

Listeria

Resultados de la evaluación de la actividad antimicrobiana de Constructive Microbes contra la bacteria Listeria monocytogenes

Dado que Constructive Microbes consisten en una mezcla de células vivas de diversas especies bacterianas, en el primer paso del experimento el líquido (diluido 1:5 y 1:10) se aplicó en el medio PALCAM. El medio se incubó en condiciones aeróbicas a 30 °C durante 48 horas. Ninguno de los microorganismos presentes en Constructive Microbes fue capaz de crecer en el medio. Por lo tanto, el medio PALCAM pudo utilizarse en las siguientes fases del experimento, y cualquier evidencia de colonias esculina-positivas resultaría exclusivamente de la presencia de células vivas de Listeria monocytogenes añadidas al líquido.

La suspensión de L. monocytogenes preparada como se describió anteriormente (0,5 del estándar de McFarland) se mezcló con el líquido no diluido de Constructive Microbes en una proporción 1:1 (2 ml de suspensión de Listeria + 2 ml de líquido) y se dejó interactuar a temperatura ambiente. Después de 24 y 48 horas, así como a los 5 días de la prueba, se diluyeron 0,5 ml de la mezcla en 1:10, 1:100, 1:1.000 y 1:10.000 con solución salina, y se inocularon 0,2 ml de cada dilución en el medio PALCAM.

Las placas se incubaron luego a 30 °C durante 24 horas. En cada tiempo evaluado, el número de células viables de L. monocytogenes se calculó en función del número de colonias esculina-positivas desarrolladas en el medio. El número de células viables no se redujo, en comparación con el valor inicial, ni siquiera después de 5 días de contacto de Listeriacon el líquido de Constructive Microbes. Sin embargo, se observó que la intensidad del crecimiento de Listeria(expresada como el diámetro de las colonias desarrolladas) dependía estrictamente de la concentración de Constructive Microbes. La preparación diluida 1:10 inhibió por completo el crecimiento de L. monocytogenes (sin colonias visibles, Fig. 1). A medida que aumentaba la dilución de la mezcla de Constructive Microbes y células de Listeria, las colonias bacterianas obtenidas eran cada vez mayores (aprox. 0,1–0,2 mm en la dilución 1:100 [Fig. 2], aprox. 0,5 mm en 1:1.000 y aprox. 1 mm en 1:10.000 [Fig. 3]).

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Fig. 1. Medio PALCAM, inoculado con Listeria monocytogenes, tratada con Constructive Microbes durante 24 horas (dilución 1:10). No se observa crecimiento bacteriano.

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Fig. 2. Medio PALCAM inoculado con Listeria monocytogenes tratada con Constructive Microbes durante 48 horas (dilución 1:100). Se observan numerosas (incontables) colonias pequeñas esculina-positivas.

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Fig. 3. Medio PALCAM inoculado con Listeria monocytogenes tratada con Constructive Microbes durante 5 días (dilución 1:10.000). Se observan numerosas colonias esculina-positivas de aproximadamente 1 mm de diámetro.

Final conclusion

  1. Constructive Microbes muestran una fuerte actividad bacteriostática contra Listeria monocytogenes, manifestándose en una inhibición completa del crecimiento del microorganismo en la dilución 1:10.

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